St John Ambulance är en grupp organisationer som tillhandahåller första hjälpen och akutmedicin. De arbetar i över 40 länder, främst i Commonwealth of Nations.

St John Ambulance har en varierande roll. I vissa delar av Australien är till exempel St John Ambulance den huvudsakliga ambulanstjänsten. På de flesta ställen är St John Ambulance mestadels frivilliga och deras roll är att ge första hjälpen vid lokala evenemang (t.ex. idrottsmatcher, lokala marknader, lopp etc.) och ge allmänheten utbildning i första hjälpen.

St John Ambulance drivs av sina grundare, Venerable Order of Saint John. Orden är en ättling till medeltidens riddarna från Hospitaller. De grundade den första filialen av St John Ambulance i Storbritannien på 1800-talet. År 1877 inrättades St John Ambulance Association för att lära ut kunskaper i första hjälpen. År 1887 grundades St John Ambulance Brigade för att ge första hjälpen vid lokala evenemang. Dessa två har sedan dess slagits samman till den engelska grenen av St John Ambulance.

Första hjälparbetare för St John Ambulance bär ofta uniform. De hade ursprungligen armégrader, men många använder nu i stället icke-militära grader. Vissa grenar har kadetter för tonåringar och äldre barn.

Alla grenar av St John Ambulance använder det åttauddiga maltesiska korset som logotyp. Denna symbol förekommer på ett antal organisationer som härstammar från riddarna från Hospitaller. Order of Malta Ambulance Corps på Irland är ett exempel på detta. Andra liknande organisationer är Röda korset och Röda halvmånen (en världsomspännande rörelse) och St Andrew's First Aid i Skottland.